MagVigen™ – Streptavidin DNA Capture

MagVigen链霉亲和素DNA捕获纳米颗粒可用于直接从溶液中捕获特定的RNA或DNA序列。纳米颗粒可以通过链霉亲和素和生物素之间的高亲和力相互作用结合到任何生物素化的DNA上。MagVigen链霉亲和素DNA捕获纳米颗粒可高效回收双链和单链DNA。短时间的孵育后，DNA产物被纳米粒子捕获。产生的纳米颗粒-寡聚物复合物可以通过磁体与样品的其余部分分离。可以使用洗脱缓冲液从纳米颗粒中洗脱保留的基因组材料。

MagVigen链霉亲和素DNA捕获纳米颗粒能够从分析样品(如细胞裂解物、全血)的盐和其他污染物中纯化DNA产物。纯化的DNA产物可以通过凝胶电泳、PCR定量和测序进一步分析。

产品内容:

• Cat# 61002: MagVigen链霉亲和素DNA捕获纳米颗粒

Cat# K61002还包括:

• DNA检测缓冲液
• 结合缓冲液1
• 结合缓冲液2

所有材料应储存在4°c下。

保质期:6个月

草案

DNA纯化

该方案被优化用于从分析样品(例如细胞裂解物、全血或血浆)中纯化生物素化的DNA样品。

DNA捕获

制备磁珠再分散缓冲液:

1. 将600μl DNA检测缓冲液加入1400μl H2O中，制备磁珠再分散缓冲液。

准备清洗缓冲液:

2. 将2.4毫升DNA检测缓冲液加入17.6毫升H2O中，制备清洗缓冲液。

准备磁珠:

3. 从仓库中取出MagVigen链霉亲和素纳米颗粒，并将其置于室温。




4. 使用前涡旋MagVigen链霉亲和素纳米颗粒10-20秒。

对于高达100皮摩尔的生物素化DNA，使用20μl的MagVigen链霉亲和素纳米颗粒。

5. 取出MagVigen链霉亲和素纳米颗粒，放入干净的1.5毫升反应管中。




6. 使用磁铁收集MagVigen链霉亲和素纳米颗粒，并去除上清液。

注意: 在微量离心管的侧面应该可以看到含有深棕色纳米颗粒的透明沉淀物。

7. 将纳米颗粒重新悬浮在等体积的磁珠再分散缓冲液中。

杂交反应:

8. 将样品在95°C下煮沸10分钟，然后将样品管放入干冰中5分钟，然后短暂离心。




9. 按所述顺序向DNA样品中加入DNA检测缓冲液、结合缓冲液1、生物素化DNA捕获寡核苷酸、结合缓冲液2。




10. 将样品在57°C(最佳温度应根据探针寡核苷酸长度和序列进行测试)下孵育2小时。。




11. 将样品冷却至室温。

磁性Pull-Down:

12. 加入MagVigen链霉亲和素纳米颗粒，室温下在滚筒上孵育1小时。




13. 孵育后，使用磁铁将捕获DNA的纳米颗粒从溶液中分离出来。




14. 用移液管小心移去上清液，注意不要干扰捕获DNA的纳米颗粒沉淀。




15. 通过将纳米颗粒重新悬浮在57℃的温洗涤缓冲液中，洗涤DNA捕获的纳米颗粒沉淀。




16. 使用磁铁收集MagVigen链霉亲和素纳米颗粒，并去除上清液。




17. 通过将纳米颗粒重新悬浮在室温的洗涤缓冲液中来洗涤DNA捕获的纳米颗粒沉淀。




18. 使用磁铁收集MagVigen链霉亲和素纳米颗粒，并去除上清液。

洗脱:

19. 将纳米颗粒重新悬浮于10 mM Tris缓冲液中，并保持所需体积。通过在80℃温育5分钟进行洗脱。




20. 用磁铁将纳米颗粒从洗脱的DNA中分离出来。




21. 将含有DNA产物的上清液转移到干净的试管中。纯化的DNA可用于随后的评估。

使用的试剂示例。可以滴定磁珠数量以获得最佳性能。

MagVigen™ – Streptavidin DNA Capture