Fluoro-Gold

Fluoro-Gold

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美国 Fluorochorome 公司于1985 年成立于美国科罗拉多州丹佛市，Fluorochorome 一直 致力于荧光染料的研究与开发，其产品Fluoro Gold（荧光金）自 1985 年来在全球范围 内被广泛应用，并有大量的参考文献。同时，Fluorochrome公司特别开发了高灵敏度的 Fluoro-Gold Antibody 、以及 Fluoro-Ruby（红色荧光金）等产品，Fluorochrome 公司坚 持以优质的产品和热情的服务赢得了良好的口碑。

小鼠右颈髓 DAPI染色纵切面的显微照片，展示了典型的荧光金标记运动神经元柱。图片最初发表于Tosolini AP、Mohan R、MorrisR(2018)。以小鼠前肢运动终板区域的全长为目标可增加荧光金进入相应脊髓运动神经元的吸收。Front.Neurol. 4:58, 1-10,4

大鼠前肢中强阳性荧光金标记的运动神经元。图片最初发表于 TosoliniAP,Mohan R(2012)。大鼠前肢运动神经元柱的空间特征。神经科学200:19-30,22.

成年小鼠腰椎脊髓的显微照片，显示了用 DAPI复染的荧光金标记的典型柱状图。图片最初发表于 MohanR, Tosolini AP, Morris, R.(2014)。神经科学 274:318-330,323

1.背景

荧光金的使用方法与其他荧光示踪剂基本相同，但在注射后存活时间、浓度范围、组织处理以及与其他组织化学技术的兼容性方面，荧光金更为灵活。

2.储存和保质期

干荧光金应存放在4 摄氏度的避光密闭容器中。妥善储存后，荧光金的保质期应超过一年。溶液中的染料也应存放在4 摄氏度的避光密闭容器中，并应保持稳定至少六个月。

8.载体

Fluoro-Gold 可溶于蒸馏水或 0.9%盐水。Fluoro-Gold 在碱性 pH 下不溶解。但它也可以用作0.2M 中性磷酸盐缓冲液中的悬浮液。

4.染料浓度

氟金已成功应用于浓度范围为 1-10%的染料。最初建议使用 4%的浓度。如果注射部位发生不良坏死，或标记太强烈，请将浓度降低至 2%溶液。如果您需要使用更精确的测量方法，氟金的分子量为532.6 道尔顿。

5.染料管理

·A.压力注射 -这可能是常用的应用模式。注射量范围为 0.05-1 μl，通常为 0.1-0.2 ml。

B.离子电渗疗法 --通过 4-10 秒脉冲离子电渗疗法(+5 至 +10ua/10 分钟)应用，可产生离散、小注射部位。

C.晶体-示踪剂晶体可以通过微量移液器的头端注入。

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6.术后存活期

观察到良好的逆行标记，存活期从两天到两个月不等。存活期通常为三到五天。较长的存活期可增强远端突起的填充，而不会使染料从细胞中扩散。

7.固定

几平任何固定剂都可以使用，也可以不用固定剂，通常使用含4%用醛的磷酸盐中性缓冲盐水。含有高浓度重金属(如锇、示)的固定剂会淬灭荧光，而高浓度(超过1%)的戊二醛可能会增加背景荧光

8.组织化学处理

含有荧光金的组织几乎可以根据任何常见的组织学技术进行处理。这包括未固定组织的低温切片(10mm)、固定组织的冷冻切片(20um)以及从嵌入塑料(0.2-4 mm)或石蜡(3-10 mm)的组织中切下的薄切片。固定组织的冷冻切片*常用。

9.组合方法

在此处理阶段，可对切片进行进一步处理以获得第二种标记物，例如放射自显影、HRP组织化学、免疫细胞化学、第二种荧光示踪剂、荧光复染剂等。

10.封片、透明化和盖玻片

切片通常封片在明胶包被的载玻片上，风干，浸入二甲苯中，并用无荧光 DPX塑料封片剂盖玻片。切片可用分级酒精脱水，除非这与第二种示踪剂不兼容。如果要将 Fluoro-Gold 与荧光免疫细胞化学相结合，则切片要风干，并用中性缓冲中甘油(1:2)直接盖玻片。

11.检查和摄影

荧光金可使用带宽带紫外线激发滤光片的荧光显微镜进行可视化。当用中性 pH 缓冲液处理组织时，会发出金色，而当用酸性(例如pH 3.3)pH 缓冲液处理组织时，会发出蓝色。可以用数码或胶片拍摄(彩色照片使用 Ektachrome 200-400 ASA胶片，黑白照片使用速度相当的胶片，例如 Tri-X)。大多数曝光时间范围为 10-60 秒，具体取决干物镜放大倍数和标记强度。三十 (80)秒曝光时间约为平均值。可以利用多次曝光同时可视化荧光金和另一种示踪剂。因此，紫外线与明场照明相结合，可在放射自显影中同时定位荧光金与 HRP或银颗粒。同样，蓝光激发也可结合使用，以品现 FITC,的绿色发射颜色，而绿色激发光可用于同时观察碘化丙啶或溴化乙锭(荧光复染剂)的红色发射颜色。

载体

对于通过微量注射器或微量移液器进行压力注射，应将氟金溶解在蒸馏水或 0.9%盐水中。氟金也可用作 0.2M 中性磷酸盐缓冲液中的悬浮液，但悬浮颗粒可能会堵塞细小的微量移液器头端，因此蒸馏水或 0.9%盐水是载体。对于离子电渗疗法，在 0.1M 醋酸盐缓冲液(pH=3.3)中配制 1% 氟金溶液。清洁干净的(95%乙醇、水)玻璃微量移液器头端应为 10-20 mm。最佳离子电渗疗法参数为+1 至 +5u 安培，脉冲电流(开启 4-10 秒，关闭 4-10 秒)持续 10-20 分钟。

注射部位

几乎任何中枢或周围神经系统结构都可以注射荧光金，以分析逆向运输。在周围神经系统中，可以研究神经节和周围靶标。对于周围神经的研究，应切断或损坏神经，然后将其浸入或注射5%的荧光金溶液中。由于完整的通道纤维不能大量吸收荧光金，因此必须切断或严重损坏纤维才能吸收染料。

运输和生存时间

荧光金被用作逆向轴突示踪剂，尽管确实存在顺向轴突运输。存活时间应该有所不同(尤其是 12 小时-2 天的非常短的存活时间)，以最大限度地提高所研究的特定神经系统中的顺向运输。对干逆向运输，存活时间应该从 4天到 14 天不等。7到 10 天适用于大多数系统，尽管长通路(例如脊髓到脑干)和大型哺乳动物(例如猫、猴子)的通路可能需要更长的存活时间(例如 14 天)。此外，由于荧光金在逆向标记的神经元内保持快速，因此数月的存活时间也会产生优异的效果。对于离子电渗疗法，建议存活时间为 2-5天。据估计，哺乳动物每天的运输速度约为2厘米;对于冷血动物来说，它的速度比较慢。

组织处理

组织处理在使用指南和原始出版物中有详细介绍(Schmued and Fallon，1986，Brain Research 877:147-154)。由于荧光金在许多溶剂中都很稳定，并且在逆向标记的神经元中保持稳定，因此它的使用与许多组织化学技术兼容。它可以与其他逆向示踪剂、免疫荧光、PAP 和 ABC免疫细胞化学、HRP组织化学、放射自显影、复染(溴化乙锭是*选的荧光复染)、石蜡包埋和塑料包埋一起使用。但是，如果组织未固定，在水溶液中对组织进行额外处理超过一两个小时将导致标记神经元的荧光金荧光消失。荧光金可能在电子显微镜中有用。荧光金可用于已切片并转移到磷酸盐缓冲液的大脑。切片通常安装在明胶包被的载玻片上，风干，浸入二甲苯中，并用 DPX塑料封片剂盖上(FLUKA Chemical Corp.,255 Oser Avenue，Hauppauge，NewYork，11788，目录号44581)。组织也可以在载玻片上观察而无需进一步处理，可以通过分级酒精进行脱水，或者，对于免疫细胞化学，可以将切片风干并直接用中性缓冲中甘油(1:2)盖上。

检查和摄影使用宽带紫外线(UV)激发滤光片，在荧光显微镜下观察荧光金。使用与在宽带紫外线下激发的其他荧光逆行示踪剂相同的滤光片组(例如，真蓝、快蓝、核黄)，例如 Leitz Ploem 滤光片系统 A(宽带紫外线、激发滤光片 BP 340-380)、镜面 RKP 400、屏障滤光片 1P430)。应专门为荧光显微镜制作物镜(例如蔡司制造的物镜)、甘油或水。由于塑料会吸收紫外线，因此不建议通过塑料培养皿等观察。推荐的胶片是 T-Max(柯达，黑白)和 Ektachrome 200(柯达，彩色幻灯片)。曝光时间通常为 20 秒到 1.5分钟。

Fluoro-Gold (Fluorogold)是 Fluorochrome,LLC 的*家产品。它由 Fluorochrome 销售，自1985 年以来被广泛使用。其他公司正在销色他们声称与Fluoro-Gold 相同或等同的产品。这些化合物的化学结构与Fluoro-Gold 不同，并且这些化合物的某些物理性质可能非常不同。

“注意:荧光金、荧光金抗体和荧光红宝石仅供安验室研光动物或体外试验研究使用。不可用于人体。这些药物应仅供定期从事神经解部学研充和体外试验或仅用于安验室研充的动物的人员使用。

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