新型植物基因组 DNA 提取试剂盒

新型植物基因组 DNA 提取试剂盒

适用范围: 

植物 DNA 提取

试剂盒组分：

Buffer FA 80ml

Buffer FB 28ml

Buffer FC 100ml*2

Buffer GW 33ml*2

Buffer GE 20ml

Rnase A(10 mg/ml) 1.2ml

吸附柱 200 个

保存条件：

Buffer GE 4°C

Rnase A 4°C 

其它组分室温保存

产品说明

本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和特*的缓冲系统，适合从各种不同的新鲜或冻存植物组织中提取基因组 DNA，并可最大限度去除植物组织中的杂质。本试剂盒无需使用酚/氯仿抽提，操作安全。提取的基因组 DNA 片段大、纯度高、质量稳定可靠，适用于 PCR、荧光定量 PCR、分子标记、文库构建等实验。

自备试剂：无水乙醇

实验前准备及重要注意事项

1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量下降。

2．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在 Buffer GW 中加入无水乙醇。使用前请检查 Buffer FA 和 Buffer FB 是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将 BufferFA 和 Buffer FB 于 56℃水浴重新溶解。 

操作步骤

1．取植物新鲜组织 50-400mg 左右，加入液氮充分研磨。

2．将研磨后的粉末收集到离心管（自备）中，加入 400ul Buffer FA 和 6ul Rnase A（10 mg/ml），涡旋振荡 1 分钟，室温放置 10 分钟，使其充分裂解。

注意：1）使用涡旋振荡或移液器吹打，充分裂解组织，组织裂解不全会影响最终的 DNA 得率。

2）请勿在使用前将 Buffer FA 与 Rnase A 混合。

3．加入 130ul Buffer FB，混匀，涡旋震荡 1 分钟。

4．13,000×g 离心 3 分钟，将上清移至新的离心管（自备）中。

5. 将上清液再次 14,000×g 离心 5 分钟，将上清转移至新的离心管（自备）中。注意：此步骤目的为去除上清液中的沉淀杂质，使提取基因组 DNA 纯度更高。

6．加入 2 倍体积的 Buffer FC，充分混匀（如 450ul 滤液加入 900ul Buffer FC）。注意：加入 Buffer FC 后应立即混匀，可能会产生沉淀但不影响后续实验。

7．将上步所得溶液和沉淀全部加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。13,000×g 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

8． 向吸附柱中加入 500ul Buffer GW（使用前检查是否已加入无水乙醇），13,000×g离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。注意：如吸附膜呈现绿色，向吸附柱中加入 500ul 无水乙醇，13,000×g 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

9．重复步骤 8。

10．13,000×g 离心 2 分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以晾干。注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR 等）。

11. 将吸附柱放到一个新离心管（自备）中，向吸附膜的中间部位悬空滴加入 50ulBuffer GE 或灭菌水，室温放置 2-5 分钟，13,000×g 离心 1 分钟，收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。注意：1）如果下游实验对 pH 值或 EDTA 敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的 pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5（可以用 NaOH将水的 pH 值调到此范围），pH 值低于 7.0 时洗脱效率不高。2）离心之前室温孵育 5 分钟可以增加产量。3）如果要提高 DNA 的终浓度，可以将步骤 10 所得的 DNA 洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤 10；

4）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE 洗脱并于-20℃保存。 

本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途

上海牧荣生物科技有限公司

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