4-香豆酸：辅酶A连接酶（ 4-coumarate:CoA ligase，4CL) 试剂盒

4-香豆酸：辅酶A连接酶（ 4-coumarate:CoA ligase，4CL)试剂盒

4CL是连接苯丙酸途径与木质素特异合成途径的关键酶，主要催化肉桂酸生成相应的肉桂酸辅酶A酯，是合成木质素与其他苯丙烷类化合物的代谢流向调控点。该酶主要存在于高等植物、酵母和菌类中，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量而提高其品质提供依据。

测定原理：

4CL催化4-香豆酸和CoA生成4-香豆酸CoA，在333nm下测4-香豆酸CoA生成速率，即可反映4CL活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：100mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体25 mL×1瓶， 4℃保存；

试剂二：粉剂×2瓶，-20℃保存；

粗酶液提取：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1. 分光光度计或酶标仪40℃预热30min以上，调节波长至333nm，蒸馏水调零。

2. 准备96孔UV板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm务必使用UV板）。

3. 样本测定

（1）在试剂二中加入5mL试剂一充分溶解混匀，置于40℃水浴预热10min；现配现用（配好后24h内用完）；

（2）对照管：在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL样本和190μL试剂一，混匀，立即记录333nm处40℃反应30min后的吸光值A1。

（3）测定管：在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL样本和190μL试剂二，混匀，立即记录333nm处40℃反应30min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。每个测定管设一个对照管。

上海牧荣生物科技有限公司

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• 中文名称：甲泛葡胺

• 英文名称：Metrizamide

分子式：C18H22I3N3O8

分子量：789.1

• CAS号：31112-62-6

  级别：Reagent Grade

• EINECS编号：250-475-5

• 储存条件：2～8℃

• 中文别名：甲泛葡胺、阿米派克、甲泛影酰胺、室椎影

• 英文别名：2-((3-(acetylamino)-5-(acetylmethylamino)-2,4,6-triiodobenzoyl)amino)-2-deox、2-(3-ace***ido-2,4,6-triiodo-5-(n-methylace***ido)benzamido)-2-deoxy-d-gluco

• 是否危险：否

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甲泛葡胺/甲泛影酰胺/室椎影/阿米派克/造影胺/Metrizamide