PRECICE® ADK Assay Kit——novocib

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NOVOCIB位于法国,公司基于核苷酸代谢检测技术,为生命科学科研用户及食品质量检测研究、制药企业,提供的酶相关检测试剂。公司拥有专门用于核苷酸代谢检测、重组蛋白酶分析及酶检测试剂研究的PRECICE®检测分析平台,实验试剂及科研服务涉及分析领域。

人腺苷激酶的高通量测定

PRECICE ^® ADK 检测试剂盒为 ADK 活性的体外测量和新型 ADK 抑制剂的药物发现 提供了一种方便、高通量兼容且非放射性的检测方法。用于药物发现的新工具，该试剂盒允许 HTS 搜索新的 ADK 抑制剂。

原理：
腺苷激酶使用ATP作为磷酸供体。它将 ATP 的末端磷酸基团转移到底物上，产生 ADP 作为副产物。该测定基于使用肌苷作为替代 ADK 底物和涉及高活性 IMPDH（肌苷一磷酸脱氢酶）的偶联反应，用于直接测量由 ADK 形成的肌苷一磷酸 (IMP)。在肌苷和ATP存在下，ADK催化肌苷磷酸化形成IMP和ADP。然后在 NAD 存在下，IMP 立即被高活性 IMPDH 氧化为 XMP，从而形成 NADH ₂。

ADK在人体中的作用

腺苷激酶是一种普遍存在的酶，可调节腺苷 (AR) 的细胞内和细胞外浓度，腺苷是中枢神经系统功能的重要调节剂，也是参与缺氧、炎症和伤害感受的信号分子。与腺苷脱氨酶一起，腺苷激酶调节细胞内和细胞外的腺苷浓度。腺苷激酶的抑制导致局部腺苷浓度的选择性增加和体内癫痫发作易感性和伤害感受的降低⁽³⁾。ADK 功能障碍涉及多种病理，包括糖尿病⁽¹³⁾、癫痫⁽⁶⁾和癌症。因此，ADK 成为一种合理的治疗靶点，腺苷调节药物已被广泛应用。测试⁽¹⁾作为新的镇痛剂和抗炎剂⁽⁴⁾治疗精神分裂症⁽⁷⁾或限制缺血性中风后的脑损伤⁽⁸⁾。

验证

使用化合物 A-134974（一种已知的 ADK 抑制剂（Sigma-Aldrich，已获得 Abbott Laboratories 的许可））验证了使用PRECICE® ADK Screening Assay Kit筛选 ADK 抑制剂和 IC50 测量。Z'-Factor 由 44 个阴性（无 ADK 抑制）和阳性（用 500nM A-134974 抑制 ADK）计算得出，测量结果为 0.68，这是筛选试验的出色性能水平

化合物 A-134974 在 12 种不同浓度下的 ADK 抑制曲线。
所有数据点代表 8 个孔的平均值 (+/-SD)（2 个孔 - 重复 - 在 4 个独立的板上）。IC ₅₀通过用最小二乘法拟合数据的4参数非线性曲线来确定。进行 IMPDH 活性测定以确认 IMPDH 不被化合物 A-134974 抑制（数据未显示）。

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