PNA寡核苷酸处理方案

1.PNA具有较高的亲和力和特异性。

2.富含嘌呤的PNA低聚物的溶解度降低，并倾向于聚集。建议低聚物的嘌呤含量低于50%，在PNA夹中一个低聚物的嘌呤（特别是G碱段不超过6段），因为水溶性非常重要。可以添加两个赖氨酸来提高长PNA或具有高嘌呤的PNA的溶解度。

存储 和 处理

1.PNA作为冻干粉（超过5年）或作为水中溶液（至少一年）储存起来非常稳定-20°或更低。对于长期存储，-70°

2.当准备使用时，向下旋转试管，将50n摩尔的PNA溶解在1 ml无菌水中，制成50 uM的原液。涡旋和混合良好，以

实现*全溶解。

3.平均分配和储存在-20°或-70°工作原液可以进一步稀释10倍（5毫米，10倍），并在4度下保存几周。

4.当PNA解冻时，加热至55°中浸泡5分钟，以实现*全溶解。

PCR 反应

*下面是一个例子。实际情况可能根据序列而变化，需要根据经验来确定。

1.准备以下PCR混合。

a.25 ul 2x PCR混合物

b.FW和RV PCR引物分别为最终0.2 uM

c.5 ul PNA钳夹（5 uM库存）至最终0.5uM（范围：0.2~5 uM）

d.DNA模板： 20 ng（10~50 ng）

e.水至50 ul

2.按如下方法运行PCR程序。

a.变性：94度 3 min

b.放大(22~40循环）

i.变性：94度 30 sec

ii.PNA夹具：65~75度为20秒（比PNA工具计算的Tm低5~10度）

iii.底漆退火：55~65度为20秒

iv.扩展：68度为30秒

c.扩展：72度, 10 min

d.保持在4度

3.取5ulPCR产物，在琼脂糖凝胶上运行。

4.夹紧反应中最常见的PNA浓度为0.4~2 uM。一般来说，如果溶解度不受影响，更高浓度的PNA可以提供更好的夹紧效果。