genecopoeia:一体化qPCR混合物(All-in-One™ qPCR Mix)简述

带有经验证引物的all-in-One qPCR混合物提供通用的qPCR反应条件和可靠的定量PCR数据。联合开发和共同优化的一体化qPCR混合物和基因特异性引物提供了您所需的全部优势，而没有您预期的任何高成本:

• 统一的反应条件减少了实验设计时间，从而能够更早提交期刊论文
• 即使是低拷贝基因也具有高扩增效率和灵敏度，这意味着每次都可以进行可靠的定量
• 不存在非特异性扩增*和引物二聚体*确保了数据的可再现性和可发布性

一体化qPCR混合物使用高保真热启动聚合酶、优化的反应缓冲液和高质量dNTPs，即使从低拷贝RNA（cDNA）或DNA物种中也能进行特异性和灵敏的扩增（图1）。

图一。使用一体化qPCR主混合物进行qPCR反应。使用GeneCopoeia全合一cDNA合成试剂盒对来自MCF-7细胞的1微克总RNA进行逆转录。将RT反应物稀释至1毫克至1毫克RNA /升。使用GeneCopoeia All-in-One qPCR混合物（A）将1升稀释的RT反应物用于随后的qPCR中35个循环。最终产物在2%琼脂糖凝胶上进行电泳（B）。

放大曲线	熔化曲线	标准曲线

图二。2X All-in-One qPCR混合物的扩增效率和检测灵敏度通过标准曲线进行评估，该标准曲线由5×10的质粒DNA梯度稀释而成6到5个分子。扩增和解链曲线的峰值表明，使用All-in-One qPCR Mix可以获得非常高的灵敏度，可以检测低至5个分子。同时，每个浓度之间良好的线性关系也显示了高扩增效率。

一体化qPCR验证引物完成任务

使用GeneCopoeia的precision qPCR消除无休止的调整和优化。只需添加多合一底漆并开始。一体式qPCR人-小鼠或大鼠特异性引物由专有算法设计并经过验证†精密性能。引物验证包括解链曲线，以确保扩增正确的靶DNA（图2）。

当与多合一SYBR结合使用时®Green qPCR Mix，多合一引物在定量PCR检测中提供可靠且可重现的高性能。

放大曲线
熔化曲线	琼脂糖凝胶电泳验证结果

图三。45对基因特异性All-in-One qPCR引物经过实验验证，可产生单一解离曲线峰，并对目标基因产生正确大小的单一扩增。将包含来自10种不同人类组织（肺、肝、睾丸、卵巢、脾、脑、胎盘、胰腺、心脏和乳腺）的总RNA的逆转录产物的cDNA库用作qPCR验证模板。使用0.2 M引物和2X多合一qPCR混合物进行qPCR。将反应物孵育10分钟。在95℃下，随后在10秒内进行40次95℃的循环。；60摄氏度20秒。72摄氏度15秒。使用Bio-Rad iQ5仪器。最后一个循环结束时，温度从72℃升至95℃，形成一条熔化曲线。显示了10个样品的扩增曲线、解链曲线和琼脂糖凝胶电泳（奇数泳道中阳性和偶数泳道中无模板对照（NTC）的验证结果）。

*当一体式验证PCR引物和PCR混合物一起使用时，确保非特异性扩增和引物二聚体的缺失。自动验证适用于人类、小鼠和大鼠的引物。查询其他物种的验证。