cytion细胞培养解离技术概述

细胞培养物解离是细胞培养物维持的关键步骤。它涉及将细胞从其生长表面分离以进行传代培养或收获。本节概述了两种主要方法：使用无酶解离缓冲液和使用酶试剂。

1. 使用无酶细胞解离缓冲液

该方法非常温和，无需使用酶即可保持细胞完整性：

1. 准备

• 确保所有试剂在使用前加热至 37°C，以避免对细胞造成冲击。

2. 去除生长培养基：

• 从培养容器中丢弃旧的生长培养基。

3. 漂洗

• 每个 T75 烧瓶或 100 mm 培养皿用 5 ml 不含钙和镁的 PBS 冲洗细胞单层。

• 在室温下轻轻摇动容器 30 至 60 秒。

• 吸出并丢弃冲洗溶液。

• 再次重复此冲洗步骤。

4. 解离

• 将大约 5 ml 无酶细胞解离缓冲液添加到容器中。

• 在室温下轻轻摇动 1 至 2 分钟，然后在显微镜下检查解离情况。

• 如有必要，用手轻敲烧瓶或培养皿以去除细胞。

• 如果细胞贴壁，让它们在室温下再静置 2 至 5 分钟，并根据需要再次敲击，使用更多的解离缓冲液。

• 细胞分离后，添加至少 5 ml 全生长培养基以中和解离缓冲液并重悬细胞。

5. 活力检查

• 在传代培养过程中监测细胞活力，确保其保持在 90% 以上。

2. 使用其他试剂进行解离

该方法允许使用各种解离试剂：

1. 去除用过的介质

• 丢弃培养容器中的旧介质。

2. 洗涤细胞

• 用不含钙和镁的平衡盐溶液清洗细胞，或使用 EDTA。

• 将洗涤液轻轻添加到细胞对面，并摇动容器 1 至 2 分钟，然后丢弃洗涤液。

3. 解离

• 每 25 平方厘米的生长表面涂抹 2 至 3 毫升所选的解离溶液，确保覆盖细胞片层。

• 将容器在 37°C 下孵育并轻轻摇动。解离通常发生在 5 至 15 分钟内，具体取决于细胞系。

• 对于顽固的细胞，敲击容器可以加快这一过程。

• 仔细观察细胞以防止过度暴露和潜在的损坏。

4. 收获细胞

• 一旦细胞分离，将其直立，让它们收集在容器底部。

• 添加完整的培养基，然后通过移液到细胞层上分散并收集细胞。

• 计数并继续传代。

在这两种方法中，重要的是通过经验观察确定每个细胞系的最佳条件。该过程应保留细胞活力，在传代培养过程中应定期检查细胞活力是否超过 90%。这些程序为研究人员根据其细胞系的具体要求和特征进行调整奠定了基础。