提取 DNA 后,大多数实验的下一阶段需要已知浓度作为输入材料。测量DNA浓度的方法有很多,如紫外吸收法、荧光染料法、电泳法等。
DNA 分光光度计通常用于测量浓度,本文将概述它们的工作原理以及使用原因。
分光光度法是一种重要的方法,用于一系列生化实验,包括 DNA、RNA 和蛋白质定量和质量控制。在这些应用中,通常仅提供少量样品,并且优选进行无损分析。使用微体积分光光度计(有时称为纳体积分光光度计或纳滴分光光度计)可最大限度地减少定量样品的使用,通常仅需要 1 µL 样品。
分光光度法是电磁光谱法的一种形式,涉及材料的透射或反射特性随波长的变化的定量测量。DNA 分光光度计使用检测器记录一定波长范围内的光束强度。
DNA 分光光度计经常用于检测紫外线、红外线和可见光辐射,但它们也可以检测电磁波谱的许多其他元素。波长范围(可以透过测试样本的颜色)是 DNA 光谱仪的一个重要特征。此外,样品透射率百分比、样品吸收率的对数范围以及有时反射率测量的百分比对于某些应用来说是重要的特征。
在溶液中,DNA 分光光度计可以测量碱基吸收的紫外线水平。DNA 和其他核酸吸收峰值波长为 260nm 的光。吸收的光量与样品中 DNA 的浓度成正比。使用比尔-朗伯方程根据透射光量计算浓度。要使用分光光度计定量 DNA,应将 DNA 悬浮在溶剂中,并用溶剂对分光光度计进行空白以校正任何背景吸光度。
分光光度计是极其精确、准确和复杂的设备,可以用作实验室的台式或模型,也可以便携式用于现场工作。
DeNovix 的 DS-11 系列在分光光度测定领域提供了革命性的性能。它结构紧凑且易于使用,能够提供具有荧光功能的全光谱紫外-可见分析,这意味着它非常适合快速核酸和蛋白质定量。