SELEX技术原理及特点

SELEX技术是指数富集配体系统进化技术（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX）。利用该技术，可以从随机单链核酸序列库中筛选出与目标物质具有高特异性和高亲和力的核酸适体（Aptamers）。自Tuerk等人提出以来，SELEX技术经过十多年的发展，已成为一种重要的研究方法和工具。

SELEX技术原理
SELEX技术的基本思路是在体外化学合成单链寡核苷酸文库，用其与目标物质混合，混合物中目标物质与核酸之间形成复合物，洗去核酸不与目标物质结合，将目标物质与目标物质分离。以核酸分子为模板，通过PCR扩增与物质结合的核酸分子，并进行下一轮筛选过程。通过反复筛选和扩增，一些不与目标物质结合或与目标物质亲和力低或中等的DNA或RNA分子被洗掉，而适配体（Adaptor Protein）则是与目标物质亲和力高的DNA或RNA分子。目标物质。RNA是从一个非常大的随机文库中分离出来的，随着SELEX过程的进行，纯度从p摩尔增加到n摩尔，最终占据文库的大部分（>90%左右）。 SELEX基于分子生物学技术合成了单链随机寡核苷酸文库。通常文库容量为 10 英寸至 10 个单链寡核苷酸序列。文库包括DNA文库、RNA文库和修饰的RNA文库。文库的中间是随机序列，序列长度往往在20到40bp之间。随机序列的两端是带有限制性内切酶位点的固定序列，是聚合酶链式反应和其他酶促反应相关引物的结合位点。在随机库中，单链随机寡核苷酸分子很容易形成多种三维结构，可以与自然界中几乎所有种类的分子相互作用。特别是RNA分子容易形成发夹、假节、凸起、茎环、G四聚体等二级结构，更容易与蛋白质、核酸和核酸相互作用。但它在体内很容易被核酸酶降解，必须进行修饰，如嘧啶环的2'2F和2'2NH修饰。与RNA相比，DNA的生产成本较低，在体内相对稳定，不易被降解。从构建的文库中筛选出的适配体（Adaptor Protein）更适合体外诊断和体内治疗。它可以与自然界中几乎所有类型的分子相互作用。特别是RNA分子容易形成发夹、假节、凸起、茎环、G四聚体等二级结构，更容易与蛋白质、核酸和核酸相互作用。但它在体内很容易被核酸酶降解，必须进行修饰，如嘧啶环的2'2F和2'2NH修饰。与RNA相比，DNA的生产成本较低，在体内相对稳定，不易被降解。从构建的文库中筛选出的适配体（Adaptor Protein）更适合体外诊断和体内治疗。它可以与自然界中几乎所有类型的分子相互作用。特别是RNA分子容易形成发夹、假节、凸起、茎环、G四聚体等二级结构，更容易与蛋白质、核酸和核酸相互作用。但它在体内很容易被核酸酶降解，必须进行修饰，如嘧啶环的2'2F和2'2NH修饰。与RNA相比，DNA的生产成本较低，在体内相对稳定，不易被降解。从构建的文库中筛选出的适配体（Adaptor Protein）更适合体外诊断和体内治疗。核酸和核酸。但它在体内很容易被核酸酶降解，必须进行修饰，如嘧啶环的2'2F和2'2NH修饰。与RNA相比，DNA的生产成本较低，在体内相对稳定，不易被降解。从构建的文库中筛选出的适配体（Adaptor Protein）更适合体外诊断和体内治疗。核酸和核酸。但它在体内很容易被核酸酶降解，必须进行修饰，如嘧啶环的2'2F和2'2NH修饰。与RNA相比，DNA的生产成本较低，在体内相对稳定，不易被降解。从构建的文库中筛选出的适配体（Adaptor Protein）更适合体外诊断和体内治疗。

SELEX技术特点
（1）库容量大，适应范围广；靶标没有限制，包括蛋白质、核酸、小分子有机物，甚至金属离子。
(2)高分辨率。根据Jenison等人的研究结果，用茶碱筛选得到的适体与茶碱结合的解离常数Kd为0.1mol/L，或在嘌呤环的N7位上没有甲基。
(3)亲和力高。以蛋白质为目标物质，适配体的解离常数可以达到nmol/L的水平，甚至pmol/L的水平。对于Mr较小的目标物质，解离常数也可以达到mol/L—nmol/L的水平。
(4)筛选过程比较简单、快速、经济。一般情况下，典型的SELEX筛选过程可在2至3个月内完成，筛选出的适配体的小规模合成和纯化不超过3天。无需特殊仪器和试剂，一般实验室即可完成。筛选抗体至少需要3至6个月，费力且成本高。筛选的自动化和规模化可以实现更多、更快、更经济的适体生产。最近，Men-donsa 等人。报道称，当SELEX与毛细管电泳相结合时，只需几天的时间就可以筛选出对目标分子具有高亲和力和高特异性的寡核苷酸适配体。
(5)筛选的实用性。筛选适配体（Adaptor Protein）可定时、定量、保质，适配体的变性和复性快速、可逆、可重复使用、可在室温下长期保存和运输，相对于抗体和其他蛋白分子具有较强的实用性。筛选条件可以根据筛选出的适配体的不同性质人为设定，合成时可以随意连接其他官能团或分子（如生物素、巯基、甲基），以满足用户的需求。需要。
(6)适配体尺寸小。作为药物施用时，仅产生很低的免疫原性，但具有很强的肿瘤穿透力，并且易于在体内清除。