X- α -Gal 是一种显色底物,可用于证明α-半乳糖苷酶活性。 Glycosynth 以具有竞争力的价格提供高纯度 (>98%) 的产品。
酵母双杂交筛选是一种检测体内 蛋白质-蛋白质相互作用的基因测定。该方法由 Stan Fields 教授及其同事 (1) 开发,可用于研究两种已知蛋白质的相互作用(例如定义对相互作用至关重要的结构域或氨基酸)。另一个重要的应用是
通过筛选文库来鉴定以前未知的特定蛋白质的结合配偶体
。
通过激活报告基因转录的能力来选择阳性克隆,使营养缺陷型酵母双杂交菌株能够在营养选择性培养基上生长。大多数双杂交方法还使用大肠杆菌 lacZ基因作为第二个报告基因。通常,在第二次筛选中,通过耗时的滤膜提升测定法来测定选择平板上生长的菌落的报告基因lacZ的激活情况。或者,在产生α-半乳糖苷酶的酵母菌株中,显色底物 X- a -Gal 可用于测定GAL4-直接基于营养选择板的两种杂交相互作用 (2)。
X- a -Gal 是 β-半乳糖苷酶(也称为蜜二糖酶或 α-D-半乳糖苷半乳糖水解酶,EC 3.2.1.22)的显色底物,这种
酶使酵母能够在生长或发酵过程中使用二糖蜜二糖作为碳源。在酿酒酵母中,这种 酶由MEL1基因 编码,该基因受多个 GAL基因的调节。该酶响应GAL4 激活而分泌,导致 X- a水解- 培养基中的半乳糖导致酵母菌落呈现蓝色。该报告系统的一大优点是它消除了对β-半乳糖苷酶过滤提升测定的需要,并且结果可以立即在选择板上看到。