T 细胞 ELISPOT 测定法检测分泌细胞的细胞因子

T细胞ELISPOT测定

T细胞ELISPOT测定的预期用途

ELISPOT检测是需要监测的灵敏的检测方法之一 离体 单细胞水平的细胞免疫反应。该测定可以准确检测T细胞响应抗原释放的分泌蛋白，例如细胞因子。测试中使用的细胞悬浮液可以来自血液（PBMC），淋巴，脾脏，骨髓或CNS组织。

经典的 T 细胞监测试验（例如混合淋巴细胞反应 [MLR] 和细胞毒性 T 淋巴细胞 [CTL] 试验）测量 CD4 +或 CD8 +  T 细胞介导的免疫反应。 MLR 和 CTL 检测都有其缺点，包括使用放射性、低通量筛选、低温保存标本的灵敏度降低和技术负担。也可以使用 RT-PCR 分析来测量 T 细胞反应。然而，该测定检测的是 mRNA 而不是分泌的蛋白质。

ELISPOT 检测没有这些缺点，已证明比 ELISA 或细胞内细胞因子染色更灵敏。1-3 高灵敏度是由于板结合抗体在细胞释放的分泌蛋白在细胞培养基中稀释、与细胞表面受体相互作用或被蛋白酶降解之前直接捕获细胞释放的分泌蛋白。这一特性允许检测极低频率的细胞因子分泌细胞 (1/100,000)，并且还提供了高通量筛选的可能性。

应用

• ELISPOT 检测已被证明是一种灵敏的系统，可用于监测人类个体或动物的疾病进展。多项研究表明，身体不同部位产生细胞因子的细胞频率的变化充分反映了免疫功能的变化。4个

• ELISPOT 检测可能有助于了解新病毒引起疾病的情况下疾病的发展，以及早期疫苗开发研究，

• ELISPOT 测定可用于分析 T 细胞反应以预测同种异体移植排斥反应。7

• ELISPOT测定可用于确定接种疫苗的非人灵长类动物PBMC中抗原特异性T细胞反应的频率8,9 和免疫大鼠的脾脏细胞10 和老鼠11.

• ELISPOT测定可能有助于更好地了解病原体如何逃避保护性免疫。12

• ELISPOT测定已用于旨在诱导肿瘤特异性T细胞的疫苗接种试验过程中。13,14

T细胞ELISPOT程序的简要说明

将细胞在涂有高亲和力单克隆抗体的ELISPOT板的孔中孵育特定时间，孵育期间产生的细胞因子与该抗体结合。随后，细胞被洗掉。用生物素化的抗细胞因子检测抗体和酶标记的链霉亲和素的组合来检测包被抗体捕获细胞因子的区域。测定的最后一步是添加底物，产生一个彩色区域（“斑点"），揭示细胞因子分泌的部位。
T细胞ELISPOT程序的不同步骤在 T细胞ELISPOT检测流程图.

这是人类PBMC中T细胞产生的IFN-γ和IL-2特异性斑点的一个例子。
该人肌内注射了 病毒 mRNA 疫苗（加强疫苗接种）。用SARS-CoV-2肽库刺激疫苗接种前后的PBMC，并在ELISPOT平板上孵育24小时（2x105 细胞/孔）

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