化学发光是一种伴随化学反应的发光现象。 化学发光底物,也称为化学发光剂,是在化学反应中传递能量并以光的形式释放能量的试剂。化学发光底物是检测蛋白质和核酸的重要工具。常用的化学发光剂有三种:酶促反应用发光底物的发光剂、直接化学发光剂和电化学发光剂。这些物质具有一些共同特征:
它们可以参与化学发光反应,具有很高的发光量子产率。
它们可以与抗原或抗体偶联并形成稳定的偶联物。
它们不会改变或很少改变标志物的物理和化学性质,尤其是免疫活性。
其应用的浓度范围不应对生物体有毒
酶催化发光反应是一种通过酶的降解发光的反应。从技术上讲,它是一种酶联免疫测定法,使用发光化学物质作为底物而不是显色剂。 使用广泛的酶是辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)。HRP可与基材鲁米诺及其衍生物一起使用,或 p-羟基苯yi酸(p-HPA)。碱性磷酸酶可与底物金刚烷基1,2-二氧杂环丁烷芳基磷酸酯(AMPPD)或4-甲基伞形磷酸酯(4-MUP)一起使用。
直接化学发光剂直接参与发光反应。它们在化学结构中具有特定的基团,可以通过简单地改变溶液的pH值而不是酶促反应来发光。吖啶酯(AE)是目前常用的直接化学发光剂,具有稳定性高、背景低、信噪比高、发光快、发光效率高等优点。
电化学发光是在电极上产生的物质形成激发态并通过电子转移反应发光的过程。电化学发光剂不直接参与化学发光反应,主要用作能量转移的催化剂或载体。这种药剂的典型代表是钌(II)三(联吡啶)2+ 3 NHS酯。电化学发光工艺既可以提高反应底物的稳定性,又可以增强灵敏度。
根据化学发光底物的特性,科学家开发了一种称为化学发光免疫测定(CLIA)的先进技术。 CLIA具有广泛的应用。它不仅可以定量或定性地检测抗原、半抗原和抗体,还可以检测核酸探针。与放射免疫测定(RIA)、免疫荧光测定(IFA)和酶免疫测定(EIA)相比,CLIA具有无辐射、标记物有效期长、自动化程度高等优点。因此,CLIA被广泛应用于医药、食品检测等科学研究。