亲和纯化树脂和方法

亲和纯化（也称为亲和色谱）被认为是强大的方法 纯化色谱 或从复杂的混合物（如粗细胞裂解物、细胞培养上清液或其他样品）中富集感兴趣的蛋白质。 

虽然选择性沉淀可能在某种程度上有助于分离不同类型的大分子，但大多数纯化方法依赖于溶液中分子与固体、固定材料的物理或化学相互作用的差异来达到预期的结果。 

例如，在亲和纯化中，通过用与所需分子特异性结合的化学固定配体处理固体载体，将目标分子与溶液中的其他组分分离。因此，当复杂的混合物通过色谱柱时，目标分子与配体结合，而溶液中的非结合组分则简单地用适当的缓冲液冲洗掉。 

最后，改变缓冲条件以破坏配体和目标分子之间的结合相互作用，并在此过程中洗脱高度纯化的目标分子。

亲和纯化功能非常强大，因为通过亲和柱一次，可以将样品纯化一千倍以上。

亲和纯化的坚实支撑

基本上，亲和色谱中使用两种类型的固体载体：多孔凝胶载体或树脂和磁珠。但是，在本文中，我们将主要关注亲和纯化树脂。

树脂或凝胶载体通常是基于糖或丙烯酰胺的聚合物树脂，在溶液中产生 直径50-150μm的珠子。除了极其多孔之外，珠子还足够大，允许生物分子在磁珠表面周围以及通过和在珠子之间畅通无阻地移动。此外，串珠形式也使实验室的工作更容易、更方便，因为它们可以很容易地分配以包装任何尺寸的色谱柱。

此外，由于配体共价连接到珠状聚合物的外表面和内表面，因此允许样品分子自由流动通过固定配体的高表面积。

目前，大多数实验室使用交联珠状琼脂糖进行蛋白质亲和纯化，因为它是重力流、低压程序和低速离心的理想选择。珠状琼脂糖树脂也可以进行额外的交联和化学硬化，以提高其承受高压的能力，但要预先警告，这会显着降低结合能力。

该基质通常具有4%（CL-4B）和6%（CL-6B）密度，均具有培养基偶联能力，适用于相同的应用（蛋白质印迹、高通量筛选、相互作用研究、突变分析、功能测定、结构分析）。磁珠的尺寸通常在 45 至 165 μm 之间，它们都具有 0.35 MPa 的压力限制。它们仅在排除限制方面有所不同（CL-4B 为 20，000 kDa，CL-6B 为 4，000 kDa）。

除琼脂糖凝胶外，聚丙烯酰胺基树脂也可用于柱亲和色谱。虽然这两种介质都具有较低的非特异性结合特性，但聚丙烯酰胺基树脂不易压缩，可以承受中压应用。

G-Biosciences 提供广泛的亲和纯化试剂盒和树脂，以适应各种应用。这里有一些 例子 这可以帮助您解决亲和纯化挑战。  

• 用于亲和素-链霉亲和素和中性粒蛋白纯化的固定化生物素和亚胺生物素树脂

• 钙调蛋白树脂用于纯化钙调蛋白结合蛋白 （CBP）

• 固定化对氨基苯基磷酸胆碱和更具成本效益的固定化O-磷酸乙醇胺用于C反应蛋白纯化

• GST 标记或 His 标记的蛋白质纯化试剂盒或树脂

• 固定化肝素和凝集素，用于分离脂蛋白、生长激素、止血蛋白和其他生理标志物

• 硫丙基树脂 用于纯化含蛋白质的硫醇基团。

G-Biosciences提供含大量用于纯化蛋白质、核酸和其他生物分子的树脂和磁珠。 几种树脂通常用于在纯化过程中去除干扰剂。 该手册首先介绍了预活化的树脂，以便研究人员可以通过各种基团偶联蛋白质和其他生物分子。接下来的部分是用于纯化特定标签和基序的树脂，包括6X组氨酸、生物素等。 主要色谱树脂包括用于离子交换色谱和体积排阻色谱的树脂。 最后，大量树脂旨在去除常见的有问题的化学物质和生物分子，包括洗涤剂、内毒素等。

《纯化树脂手册》包括以下部分：

• 亲和纯化树脂
  

• 用于偶联巯基、胺、羧基、碳水化合物和活性氢的预活化树脂

• 亲和素和链霉亲和素纯化树脂
  

• 固定化生物素和低亲和力的伊尼博汀

• 用于纯化生物素和生物素标记分子的树脂

• 固定化亲和素和单体亲和素以及低亲和力链霉亲和素

• 用于CBP标签的钙调蛋白树脂

• C-反应蛋白纯化树脂

• GST标记的蛋白质纯化

• 用于酵母和细菌重组蛋白的谷胱甘肽树脂和蛋白质纯化试剂盒

• 组氨酸标记蛋白纯化

• IDA 和 NTA 树脂、色谱柱、板和磁珠

• 提供镍、钴、铜和锌版本

• 固定化肝素

• 用于碳水化合物分离的固定化凝集素

• 凝集素纯化树脂

• 核酸纯化树脂

• 固定化硼酸和二氧化硅磁珠

• 蛋白酶纯化树脂

• 抗体纯化树脂

• 蛋白 A、蛋白 G 和蛋白 A/G 树脂和色谱柱

• IgA纯化树脂

• 亲硫吸附

• 凝胶过滤/体积排阻色谱

• 疏水作用色谱

• 离子交换色谱

• 阴阳离子交换器

• 除污树脂

• 去污树脂

• 内毒素去除树脂

• 脱盐和缓冲液交换离心柱

• 还原剂树脂，包括TCEP

• 去除白蛋白

• 多种一次性色谱柱可供选择